2024年10月28日，西北大学Wu Guojun、空军军医大学张瑞共同通讯在Biomaterials 上在线发表题为“Genetically modified extracellular vesicles loaded with activated gasdermin D potentially inhibit prostate-specific membrane antigen-positive prostate carcinoma growth and enhance immunotherapy”的研究论文。该研究制备了一种基因工程重组细胞外囊泡PSMAscFv-EVN-GSDMD，其表面表达对前列腺特异性膜抗原（PSMA）具有高亲和力的单链可变抗体片段（scFv），并负载有gasderminD（GSDMD）的N-末端结构域。

基于 EV 的基因疗法对 PCa 治疗很有希望。研究团队设计了 PSMAscFv-Lamp2b-HA，一种慢病毒载体，表达溶酶体相关膜糖蛋白 2b 基因 （Lamp2b），含有前列腺特异性膜抗原 （PSMA） 特异性 scFv，并将其转染到 HEK-293T 细胞中，获得一种新型 EV，称为 PSMAscFv-EV [21]。随后，通过将 N-GSDMD 加载到 PSMA 中scFv-EV，获得PSMAscFv-电动汽车N-GSDMD，一种基于 HEK-293T EV 的多功能靶向递送平台。设想该平台可以靶向 PSMA 受体，并在没有蛋白酶切割的情况下直接触发 PSMA 阳性 PCa 细胞的焦亡。相关体外和体内结果表明，PSMAscFv-电动汽车N-GSDMD可以特异性靶向 PSMA 阳性 PCa 细胞，导致肿瘤生长抑制和抗肿瘤免疫反应激活。

为了构建靶向 PCa 的功能性 EV，研究团队设计了一种靶向 PSMA 的 scFv，并将其融合到 EV 膜中丰富的 LAMP2B 的 N 端结构域 。将这种融合整合到 pcDNA 3.1 （−） 载体中，以生成表达 PSMA 的质粒_scFv-Lamp2b-HA。在该质粒中，血凝素 （HA） 标签被添加到 LAMP2B 的 C 端。用 PSMA 转染 HEK-293T 细胞_scFv-Lamp2b-HA 质粒产生 PSMA_scFv-过表达 EV . 生成控制点 EV （Ctrl-EVs） 以用作控制点。通过超速离心从转染的 HEK293T 细胞的培养上清液中分离 EV。采用纳米粒子跟踪分析 （NTA） 和透射电子显微镜 （TEM） 测量 EV 的直径并评估其形态;结果表明 EVs 在外泌体范围内。PSMA 的引入_scFv-Lamp2b-HA 修饰不会改变 EV 形态或大小分布。 Western blotting 结果显示，HEK293T 细胞及其衍生的 EV 均有效表达融合蛋白 PSMA_scFv-Lamp2b-HA。此外，EV 生物标志物 TSG101 和 CD63 的存在证实了EV 提取过程的可靠性。

在这项研究中，我们建立了 PSMA_scFv-电动汽车^N-GSDMD，一种基于 HEK-293T EV 的多功能靶向递送平台，并提出了一种可行的 EV 工程策略来特异性诱导焦亡，从而在肿瘤细胞中引发有效的抗肿瘤免疫反应。重要的是，PSMA_scFv-电动汽车^N-GSDMD治疗导致 22RV1 异种移植物小鼠和 RM-1-PSMA 双荷瘤小鼠的肿瘤受到严重抑制，不良反应最小。总之，结果代表了利用工程 EV 诱导焦亡以进行癌症治疗的潜在有效策略。这种工程化 EV 在 PCa 靶向治疗方面具有巨大潜力，同时也为 PCa 免疫治疗提供了新的见解。

（来源：Biomaterials ） 

　原文来源：https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S01224004289?via%3Dihub#sec3

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